全程常溫(15-25°C)操作，無(wú)需冰浴和低溫離心。
整套試劑盒RNase-Free，無(wú)需擔(dān)心RNA降解。
該試劑盒特別適合于多糖多酚植物樣本RNA的純化。
DNA-Cleaning Column特異結(jié)合DNA，使得試劑盒無(wú)需額外添加DNase即可去除基因組DNA污染。
RNA得率高：RNA-only Column和獨(dú)特配方搭配能高效的純化RNA。
速度快：操作簡(jiǎn)便，可在30分鐘內(nèi)完成。
安 全：無(wú)需有機(jī)試劑抽提。
質(zhì)量高：提取得到的RNA片段純度高，沒(méi)有蛋白和其他雜質(zhì)污染，能夠滿足下游各種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。
產(chǎn) 品 名 稱 | 多糖多酚植物總RNA提取試劑盒 Plant Total RNA Isolation Kit Plus | |
貨 號(hào) | RE-05021 | RE-05024 |
規(guī) 格 | 50T | 200T |
價(jià) 格 | ￥946.00 | ￥3,183.00 |
描 述 | 快速?gòu)亩喾N多糖多酚含量高的植物樣本中純化高質(zhì)量總RNA，試劑盒包含Foregene純化柱及試劑。 | |
產(chǎn)品介紹
該試劑盒采用本公司研制的離心柱和配方，可以從各種多糖多酚含量高的植物組織中高效率的提取得到高純度高質(zhì)量的總RNA。提供DNA-Cleaning Column能輕松的讓上清液和組織裂解物分離，去除樣品中的DNA，操作簡(jiǎn)便、省時(shí)；RNA-only Column能高效的結(jié)合RNA，搭配獨(dú)特的配方，可以同時(shí)處理大量樣品。
全體系RNase-Free，使得提取的RNA無(wú)降解；Buffer PRW1、Buffer PRW2緩沖液洗滌體系，使得獲得的RNA無(wú)蛋白、無(wú)DNA、無(wú)離子、無(wú)有機(jī)化合物污染。
試劑盒應(yīng)用
該試劑盒適用于多糖多酚含量高的新鮮或凍存的植物組織樣本(尤其是新鮮植物葉片組織)總RNA的提取純化。
純化RNA的應(yīng)用
多糖多酚植物總RNA提取試劑盒提取得到的總RNA可用于各種下游分子實(shí)驗(yàn)，例如：cDNA合成，RT-PCR、Real Time PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯、芯片分析、PolyA篩選、分子克隆和RNase保護(hù)分析等。
RNA提取得率和純度
使用植物總RNA提取系列試劑盒可以從多種植物組織中純化得到的RNA，其產(chǎn)量與植物樣本本身、樣本初始量、樣本新鮮程度、樣本保存時(shí)間以及操作相關(guān)。以下是使用該試劑盒提取50mg各種植物樣本RNA的得率與純度，實(shí)際操作中，可能與該數(shù)據(jù)有出入。
新鮮幼嫩葉片 50mg | 總RNA產(chǎn)量 (μg) | OD260/OD280 | OD260/OD230 |
香蕉 | 18-20 | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
銀杏 | 18-20 | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
棉花 | 12-15 | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
石榴 | 21-23 | 1.8-2.1 | 1.8-1.9 |
注意：以上數(shù)據(jù)均得自于植物新鮮葉片，若是植物葉片較老，或是植物其他部位(如葉脈、根莖等)，抑或是樣本保存時(shí)間過(guò)久，RNA的得率或低于上表中數(shù)據(jù)。
儲(chǔ)存條件
常溫(15–25℃)，有效期為 24個(gè)月。
試劑盒內(nèi)容
Buffer PSL1：提供植物組織裂解所需的環(huán)境。
Buffer PS：補(bǔ)充多糖多酚含量高的植物組織裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。
Buffer PSL2：提供 RNA 的特異上柱環(huán)境。
Buffer PRW1：去除 RNA 中的蛋白質(zhì)、DNA 等雜質(zhì)。
Buffer PRW2：去除 RNA 中殘留的鹽離子。
RNase-Free ddH2O：洗脫純化柱膜上的總 RNA。
DNA-Cleaning Column：特異吸附組織裂解產(chǎn)物中的 DNA，并過(guò)濾除去裂解產(chǎn)物 中的固體雜質(zhì)。
RNA-only Column：特異吸附上通過(guò) DNA-Cleaning Column 濾液中的總 RNA。
產(chǎn)品信息
型號(hào) | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個(gè)樣品 | 制備時(shí)間 | ~30 min (24個(gè)樣品) |
離心機(jī) | 臺(tái)式離心機(jī) | 植物組織裂解物分離 | 離心分離 |
純化柱RNA承載量 | 160 μg | 離心柱液體盛裝量 | 800 μL |
洗脫體積 | 50-200 μL | 植物樣本處理量 | 50 mg |
操作流程
說(shuō)明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
RNAsequencing-based transcriptome analysis of mature strawberry fruit infected bynecrotrophic fungal pathogen Botrytis cinerea
Xiong Jin-Song, Zhu Hong-Yu, Bai Yi-Bo, Liu Hui, Cheng Zong-Ming ??
南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院
Physiological and Molecular Plant Pathology ( IF 1.395 ) Pub Date : 2018-12, DOI：10.1016/j.pmpp.2018.08.005
文章鏈接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0885576518302091
MSDS
COA
離心柱發(fā)生堵塞
Answer
離心柱發(fā)生堵塞之后會(huì)造成RNA得率降低甚至不能純化得到RNA，同時(shí)提起得到的RNA質(zhì)量低下。
常見(jiàn)原因分析：
1. 樣本破碎不徹底。
樣本破碎不徹底會(huì)使DNA-Cleaning Column發(fā)生堵塞，同時(shí)會(huì)影響RNA得率及質(zhì)量。我們建議在進(jìn)行樣本破碎的時(shí)候，在足量的液氮中快速研磨操作，盡量破碎樣本細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等組織。對(duì)于多酚多糖的植物樣本，我們建議您使用Plant Total RNA Isolation Kit Plus。
2. 吸取DNA-Cleaning Column分離后的上清液時(shí)，吸入了可能的細(xì)胞碎片沉淀物。
吸取的細(xì)胞碎片沉淀物會(huì)使在進(jìn)行RNA吸附操作時(shí)(見(jiàn)操作步驟第5步、多糖多酚操作步驟第六步)，將會(huì)堵塞RNA-only Column。我們建議在吸取該上清時(shí)一定要小心謹(jǐn)慎，以避免細(xì)胞碎片被吸取。
3. 樣本初始量過(guò)多。
樣本使用量過(guò)多將會(huì)造成樣本破碎不完全或者Buffer PSL1裂解細(xì)胞時(shí)不完全，導(dǎo)致純化操作是純化柱堵塞。Plant Total RNAIsolation Kit每單次純化操作樣本的初始最大量為50mg。對(duì)于多酚多糖的植物樣本，我們建議您試用Plant Total RNA Isolation Kit Plus。
4. 離心機(jī)的溫度過(guò)低。
整個(gè)RNA分離純化除了液氮破碎樣本組織外，所有的步驟均在常溫(20-25℃)進(jìn)行。有些低溫離心機(jī)的溫度低于20℃，可能會(huì)造成DNA-Cleaning Column和(或)RNA-Only Column的堵塞。如果發(fā)生這種現(xiàn)象，請(qǐng)將離心機(jī)溫度設(shè)置到20-25℃，并將裂解混合物和(或)添加了乙醇分離上清預(yù)熱到37℃。
提取不到RNA或者RNA產(chǎn)量低
Answer
通常會(huì)有多種因素影響回收效率，比如：樣本RNA含量、操作方法、洗脫體積等。
常見(jiàn)原因分析：
1. 操作過(guò)程中進(jìn)行了冰浴或低溫(4°C)離心。
建議：全程常溫(15-25°C)操作，切勿冰浴和低溫離心。
2. 樣本保存不當(dāng)或樣本保存時(shí)間過(guò)久導(dǎo)致RNA已經(jīng)降解。
建議：新采集的樣本應(yīng)立即放入液氮中速凍，之后長(zhǎng)期保存于-80℃并避免樣本的反復(fù)凍融；或者將樣本立即浸泡在RNA穩(wěn)定劑RNAlater溶液中(動(dòng)物樣本)。
3. 樣本破碎裂解不充分導(dǎo)致純化柱堵塞。
建議：在組織研磨時(shí)，請(qǐng)保證組織充分研磨，并在研磨完成后迅速轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備好的Buffer PSL1(確認(rèn)已添加正確比例的β-ME，見(jiàn)操作步驟第1步)中。
4. 洗脫液添加不正確。
建議：確認(rèn)RNase-Free ddH2O滴加到了純化柱膜中間位置。
5. Buffer PSL2或Buffer PRW2中沒(méi)有添加正確體積的無(wú)水乙醇。
建議：請(qǐng)按照說(shuō)明書，在試劑盒使用前，Buffer PSL2和Buffer PRW2中添加正確體積的無(wú)水乙醇并混勻。
6. 組織樣本用量不合適。
建議：每500μl Buffer PSL1使用組織量為50mg，組織使用過(guò)多會(huì)導(dǎo)致RNA提取量降低并且得到的RNA純度也會(huì)降低。我們強(qiáng)烈建議每單次RNA提取操作，樣本初始用量一定不要超過(guò)50mg。
7. 洗脫體積不合適或洗脫不徹底。
建議：純化柱的洗脫液體積為50-200μl；若洗脫效果并不理想，建議在加入預(yù)熱的RNase-Free ddH2O后，延長(zhǎng)室溫放置的時(shí)間，例如放置5-10min。
8. 純化柱在BufferPRW2洗滌之后有乙醇?xì)埩簟?/span>
建議：如果在Buffer PRW2洗滌，空管離心1min后還有乙醇?xì)埩?，可以將空管離心操作的時(shí)間增加至2min，或?qū)⒓兓糜谑覝?/span>5min，以充分除去殘留乙醇。
9. 試劑盒使用不正確。
建議：對(duì)于多酚多糖的植物樣本，使用普通的試劑盒如Plant Total RNA Isolation Kit可能不能獲得理想的RNA樣品，我們建議您使用Plant Total RNA IsolationKit Plus，這是我們專門針對(duì)多酚多糖植物樣本而研制的專門用于提取多酚多糖類植物樣本RNA的試劑盒。
OD260/OD280值偏低
Answer
ddH2O進(jìn)行RNA洗脫，并用于分光光度計(jì)讀數(shù)時(shí)會(huì)時(shí)OD260/OD280值偏低。我們建議如果要得到相對(duì)正確的OD260/OD280值，使用pH7.5 10mM Tris-HCl(而不是RNase-Free ddH2O洗脫RNA)，具體見(jiàn)第十九頁(yè)的“RNA濃度及純化檢測(cè)”。
純化獲得的RNA有降解
Answer
純化得到的RNA的質(zhì)量和樣本的保存、RNase污染、操作等因素有關(guān)。
常見(jiàn)原因分析：
1. 組織樣本采集后沒(méi)有及時(shí)保存。
建議：組織樣本在收集后若不及時(shí)使用，請(qǐng)立即低溫保存于液氮中或經(jīng)液氮速凍后立即轉(zhuǎn)移至-80℃長(zhǎng)期保存，或者將樣本立即浸泡在RNA穩(wěn)定劑RNAlater溶液中(動(dòng)物樣本)。提取RNA請(qǐng)盡量使用新近采取的組織樣本。
2. 組織樣本反復(fù)凍融。
建議：組織樣本保存時(shí)，最好剪成小段保存，使用時(shí)取出其中一部分即可，避免樣本的反復(fù)凍融導(dǎo)致RNA的降解。
3. 操作間有RNase引入或沒(méi)有佩戴一次性手套、口罩等。
建議：RNA提取實(shí)驗(yàn)最好在單獨(dú)的RNA操作間進(jìn)行，并在實(shí)驗(yàn)前清理好實(shí)驗(yàn)桌，實(shí)驗(yàn)時(shí)佩戴一次性手套、口罩，最大程度上避免RNase引入導(dǎo)致的RNA降解。
4. 試劑在使用過(guò)程中被RNase污染。
建議：更換新的植物總RNA提取系列試劑盒進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
5. RNA操作時(shí)所用的離心管、槍頭等有RNase污染。
建議：確認(rèn)RNA提取時(shí)所用到的離心管、槍頭、移液器等都是RNase-Free。
采用第三代RNA提取技術(shù)，無(wú)需使用DNase，20分鐘各種動(dòng)物組織中高效率提取獲得高質(zhì)量的組織總RNA。
采用第三代RNA提取技術(shù)，無(wú)需使用DNase，快速?gòu)母鞣N細(xì)胞中高效率提取獲得高質(zhì)量的總RNA。
采用第三代RNA提取技術(shù)，無(wú)需使用DNase，快速?gòu)闹参飿颖?多糖多酚含量低)中提取獲得高質(zhì)量的總RNA。
