產 品 名 稱 | 鼠尾直接PCR試劑盒-防PCR產物污染體系 Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG | ||
貨 號 | TP-01341 | TP-01343 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價 格 | ￥1,114.00 | ￥7,525.00 | |
| 描 述 | 快速的從鼠尾、小鼠組織樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應，適合快速大規(guī)?；驒z測；增加了UNG防污染體系，杜絕假陽性。 試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產品介紹
本產品采用獨特的裂解緩沖液體系可以快速的從小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等組織樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。
裂解緩沖液釋放基因組DNA過程在65℃條件下10-30 min內完成，不需要其他去蛋白、RNA等的過程，即可將釋放出的微量DNA作為模板進行PCR反應。
2× M1-PCR EasyTM Mix具有很強的PCR反應抑制物耐受性，能以待測樣本的裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑包含Foregene D-Taq DNAPolymerase、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。與裂解緩沖液配合使用能夠快速簡便地對樣品進行檢測，并具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。
2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)在2× PCR EasyTM Mix的基礎上用dUTP替代了dTTP，并同時加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反應前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR產物，UNG酶對不含有尿嘧啶的模板不會造成任何影響，從而保證擴增的特異性和準確性，防止了大規(guī)模基因檢測時可能出現的PCR產物污染問題。
D-Taq DNA polymerase是Foregene為直接PCR反應專門研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對多種PCR反應抑制劑具有極強的的耐受性、在各種復雜反應體系中均能高效擴增痕量的DNA，擴增速度可達2Kb/min，特別適合進行直接PCR反應。
試劑盒應用
適用范圍：小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等組織。
樣本裂解釋放的DNA：僅用作PCR模板。
試劑盒可用于以下用途：轉基因型鑒定、動物基因分型等。
試劑盒局限性
擴增片段≤1kb；超過1kb，擴增效率下降或者擴增失敗。
UNG防PCR產物污染體系得到的PCR產物請勿用于基因克隆或測序。
PCR產物3’末端隨機加A尾。
試劑盒內容
Buffer MP：提供小鼠組織裂解反應所需的環(huán)境。
Foregene Protease Plus：在裂解緩沖液的環(huán)境下，裂解鼠尾或小鼠組織，釋放基因組DNA。
2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)：在2× M1-PCR EasyTMMix的基礎上用dUTP替代了dTTP，并同時加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶，從而能夠有效防止PCR擴增產物污染。包含福際生物特別改造的D-Taq DNA Polymerase、UDG、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應時，只需將適當的裂解混合液、引物、ddH2O添加到2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)中即可用于PCR反應。
6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進行瓊脂糖凝膠電泳時，配搭使用試劑盒附贈的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時會在泳道中有一大團拖尾亮光，影響實驗結果。
儲存條件
全程低溫冰盒運輸，保證試劑盒Part I、Part II處于＜4℃狀態(tài)。
本試劑盒Part I保存在2-8℃。
v 試劑Buffer MP，在干燥條件下，可保存12個月；如需保存更長時間可置于2–8℃。
v 試劑Foregene Protease Plus，具有獨特配方，為保證其活性和穩(wěn)定性，請保存于4℃，保存時間為12個月。
v 試劑6× DNA Loading Buffer，可置于4℃或-20℃長期保存。
本試劑盒Part II保存在-20℃。
v 試劑2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)，在-20℃條件下可保存12個月；若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內用完)。
操作流程
說明書
產品文獻
MSDS
COA
正對照、待測樣本均無條帶
Answer
在試劑盒的使用過程中往往會遇到許多問題，比如：沒有PCR擴增產物、PCR特異性差等，以下就分別對使用鼠尾直接PCR系列試劑盒可能會遇到的問題進行分析。建議在進行直接PCR的同時設置陽性對照或陰性對照以便后續(xù)分析實驗結果。
1. PCR反應體系或反應條件不合適。
建議：使用梯度PCR摸索PCR最佳反應條件。
2. PCR試劑保存不當失去活性。
建議：2× PCR Mix應保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
3. 引物設計問題。
建議：嘗試重新設計引物進行檢查。
正對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱
Answer
1. PCR條件沒有使用正確。
建議：請仔細確認2× PCR Mix的類型，對應相應的PCR條件進行PCR擴增。
2. 加入組織裂解液過量。
建議：增大反應體系，或減少裂解液的用量。
3. 樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經降解。
建議：裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。
4. 模板加入量不適合。
建議：在反應體系10-20%范圍內優(yōu)化模板加入量。反應效性能較差時，可以降模板濃度調節(jié)到低于10%的范圍。
5. PCR循環(huán)數不足。
建議：適當增加PCR的循環(huán)數，推薦在35-40循環(huán)為佳。因為模板復雜，一般PCR反應要比用純化的DNA模板多5-10個循環(huán)為佳。
非特異性擴增
Answer
1. 退火溫度偏低。
建議：適當提高退火溫度?；驅ν嘶饻囟茸鲆粋€梯度摸索。
2. PCR循環(huán)數過多。
建議：適當降低循環(huán)次數，推薦在35-40循環(huán)為佳。
3. 引物濃度偏高。
建議：適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可以在0.1-0.5μM范圍內調整引物濃度。
4. 模板加入量過多。
建議：將模板加入量控制在10-20%。反應效性能較差時，可以降模板濃度調節(jié)到低于10%的范圍。
空白對照出現目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。
2. 樣本間交叉污染。
建議：每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。
3. PCR產物污染。
建議：如果實驗室檢測同類型樣本多，最好使用UNG防PCR產物污染系統的試劑盒進行實驗。
