產(chǎn)品名稱 | 斑馬魚直接PCR試劑盒 Zebra Fish Direct PCR Kit | ||
貨 號 | TP-01411 | TP-01413 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價(jià) 格 | ￥970.00 | ￥6,069.00 | |
| 描 述 | 快速的從斑馬魚等淡水魚類組織、尾鰭或魚卵樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)，適合快速大規(guī)模基因檢測；試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品采用獨(dú)特的裂解緩沖液體系可以快速的從斑馬魚等淡水魚類組織、尾鰭或魚卵樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。
裂解緩沖液釋放基因組DNA過程在65℃條件下10-30 min內(nèi)完成，不需要其他去蛋白、RNA等的過程，即可將釋放出的微量DNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2× PCR EasyTM Mix具有很強(qiáng)的PCR反應(yīng)抑制物耐受性，能以待測樣本的裂解液為模板，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增。該試劑包含Foregene D-Taq DNAPolymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。與裂解緩沖液配合使用能夠快速簡便地對樣品進(jìn)行檢測，并具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。
D-Taq DNA polymerase是Foregene為直接PCR反應(yīng)專門研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對多種PCR反應(yīng)抑制劑具有極強(qiáng)的的耐受性、在各種復(fù)雜反應(yīng)體系中均能高效擴(kuò)增痕量的DNA，擴(kuò)增速度可達(dá)2Kb/min，特別適合進(jìn)行直接PCR反應(yīng)。
試劑盒應(yīng)用
適用范圍：斑馬魚等淡水魚類。
樣本裂解釋放的DNA：僅用作PCR模板。
試劑盒可用于以下用途：轉(zhuǎn)基因型鑒定、動(dòng)物基因分型等。
試劑盒局限性
擴(kuò)增片段≤1kb；超過1kb，擴(kuò)增效率下降或者擴(kuò)增失敗。
PCR產(chǎn)物如用于測序建議先進(jìn)行PCR產(chǎn)物純化。
PCR產(chǎn)物可能會(huì)有點(diǎn)突變，如用于基因克隆，請知悉。
PCR產(chǎn)物3’末端隨機(jī)加A尾。
試劑盒內(nèi)容
Buffer FP：提供斑馬魚組織裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。
Foregene Protease：在裂解緩沖液的環(huán)境下，裂解斑馬魚組織，釋放基因組DNA。
2× PCR EasyTM Mix：包含福際生物特別改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應(yīng)時(shí)，只需將適當(dāng)?shù)牧呀饣旌弦?、引物?/span>ddH2O添加到2× PCR EasyTM Mix中即可用于PCR反應(yīng)。
6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，配搭使用試劑盒附贈(zèng)的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結(jié)果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時(shí)會(huì)在泳道中有一大團(tuán)拖尾亮光，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
儲(chǔ)存條件
全程低溫冰盒運(yùn)輸，保證試劑盒Part I、Part II處于＜4℃狀態(tài)。
本試劑盒Part I保存在2-8℃。
v 試劑Buffer FP，在干燥條件下，可保存12個(gè)月；如需保存更長時(shí)間可置于2–8℃。
v 試劑Foregene Protease，具有獨(dú)特配方，為保證其活性和穩(wěn)定性，請保存于4℃，保存時(shí)間為12個(gè)月。
v 試劑6× DNA Loading Buffer，可置于4℃或-20℃長期保存。
本試劑盒Part II保存在-20℃。
v 試劑2× PCR EasyTM Mix，在-20℃條件下可保存12個(gè)月；若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內(nèi)用完)。
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
MSDS
COA
正對照、待測樣本均無條帶
Answer
在試劑盒的使用過程中往往會(huì)遇到許多問題，比如：沒有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物、PCR特異性差等，以下就分別對使用斑馬魚直接PCR系列試劑盒可能會(huì)遇到的問題進(jìn)行分析。建議在進(jìn)行直接PCR的同時(shí)設(shè)置陽性對照或陰性對照以便后續(xù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
1. PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。
建議：使用梯度PCR摸索PCR最佳反應(yīng)條件。
2. PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。
建議：2× PCR EasyTM Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時(shí)避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時(shí)間存放。
3. 引物設(shè)計(jì)問題。
建議：嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。
正對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱
Answer
1. PCR條件沒有使用正確。
建議：請仔細(xì)確認(rèn)2× PCR Mix的類型，對應(yīng)相應(yīng)的PCR條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
2. 加入組織裂解液過量。
建議：增大反應(yīng)體系，或減少裂解液的用量。
3. 樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時(shí)間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。
建議：裂解液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。
4. 模板加入量不適合。
建議：在反應(yīng)體系10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應(yīng)效性能較差時(shí)，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
5. PCR循環(huán)數(shù)不足。
建議：適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟０鍙?fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳。
非特異性擴(kuò)增
Answer
1. 退火溫度偏低。
建議：適當(dāng)提高退火溫度。或?qū)ν嘶饻囟茸鲆粋€(gè)梯度摸索。
2. PCR循環(huán)數(shù)過多。
建議：適當(dāng)降低循環(huán)次數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。
3. 引物濃度偏高。
建議：適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時(shí)，可以在0.1-0.5μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
4. 模板加入量過多。
建議：將模板加入量控制在10-20%。反應(yīng)效性能較差時(shí)，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。
2. 樣本間交叉污染。
建議：每個(gè)取樣器只對一個(gè)樣本使用；或取完一個(gè)樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復(fù)涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。
3. PCR產(chǎn)物污染。
建議：如果實(shí)驗(yàn)室檢測同類型樣本多，最好使用UNG防PCR產(chǎn)物污染系統(tǒng)的試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
