產 品 名 稱 | 通用質粒小量提取試劑盒 General Plasmid Mini Kit |
貨 號 | DE-01001 |
規(guī) 格 | 50T |
價 格 | ￥181.00 |
描 述 | 快速從轉化菌中純化用于轉化、酶切等常規(guī)分子生物學實驗的高質量質粒DNA。 |
產品介紹
本公司的核酸提取和純化系列產品可以從多種來源和復雜成分樣本中提取純化到高質量的核酸。DNA系列產品基于DNA-Only硅膠膜純化柱和獨特配方試劑可以從多種樣本中純化得到高質量DNA。
General Plasmid Mini Kit采用DNA-Only純化柱技術及高效的SDS裂解配方，可以在20分鐘內從細菌中獲得高質量的質粒DNA。離心柱中采用的DNA-Only硅膠膜為本公司特有新型材料，高效、專一吸附DNA，可最大限度的去除RNA、雜質蛋白、離子及細胞中其他有機化合物。DNA-Only純化柱的質粒DNA最大結合能力為60μg DNA，實際提取獲得的質粒DNA量與菌液體積、質?？截悢?/span>(高拷貝、低拷貝)、菌株、培養(yǎng)條件等因素相關。
試劑盒應用
該試劑盒適用于革蘭氏陰性菌的質粒DNA提取純化。
純化DNA的應用
通用質粒提取試劑盒純化獲得的質粒DNA純度高，可用于常規(guī)分子生物學操作，如：轉化、酶切、PCR、文庫構建、轉染(傳代細胞轉染)、測序(建議使用ddH2O洗脫質粒DNA)。
DNA提取得率和純度
提取的質粒DNA量與細菌培養(yǎng)濃度、拷貝數、菌株、培養(yǎng)條件等因素有關；獲得的質粒DNA純度高，OD260/280=1.7-1.9。
質粒類型 | 培養(yǎng)條件 | 質粒種類 | 得 率 |
低拷貝 | LB、37℃、16hr | pBR322、pACYC及其衍生載體、SuperCos、pWE15、pSC101及其衍生載體 | 1-3μgDNA/ml菌液 |
高拷貝 | LB、37℃、16hr | pcDNA3.1、pBS、pTZ、pGM-T | 5-8μgDNA/ml菌液 |
注：以上數據僅供參考，實際得率和細菌培養(yǎng)條件，培養(yǎng)時間，操作等有關。
試劑盒內容
Buffer S1：提供細菌裂解環(huán)境。
Buffer S2：裂解細菌，變性蛋白和DNA。
Buffer S3：沉淀蛋白和基因組DNA，并提供質粒DNA上柱環(huán)境。
Buffer PW：去除質粒DNA中的蛋白質、RNA等雜質。
Buffer WB2：去除質粒DNA中的殘留的鹽離子。
Buffer EB：洗脫純化柱膜上的質粒DNA。
DNA-Only Column：特異吸附裂解產物中的質粒DNA。
產品信息
型號 | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個樣品 | 制備時間 | 20 min (24個樣品) |
離心機 | 臺式離心機 | 細菌裂解物分離 | 離心分離 |
離心柱液體盛裝量 | 800 μL | 純化柱DNA承載量 | 60 μg |
洗脫體積 | 50-200 μL | 細菌處理量 | 1-5 mL |
操作流程
說明書
產品文獻
MSDS
COA
低產量或無DNA
Answer
通常有多種因素會影響質粒DNA的產量，包括菌種、質粒、培養(yǎng)條件、操作等等。
1. 培養(yǎng)的細菌沒有轉化相應的質粒DNA或細菌培養(yǎng)條件不正確。
建議：挑選確定含有轉化質粒DNA的細菌進行培養(yǎng)，并確認細菌培養(yǎng)條件。
2. 細菌保存時間過長。細菌在甘油凍存液中保存時間較長，常會出現質粒丟失的現象。
建議：可以重新劃平板，挑取含質粒的單菌落或重新轉化細菌。
3. 細菌制備時間過長。
建議：使用新制備的細菌提取質粒DNA。
4. Buffer S2出現沉淀。
建議：將Buffer S2置于37℃溶解，混勻后再使用。
5. Buffer WB2沒有添加無水乙醇。
建議：確認Buffer WB2中添加正確體積的無水乙醇。
6. 細菌重懸不徹底或者沒有進行細菌重懸。
建議：離心收集的菌體在加入Buffer S1后徹底重懸，可以使用移液器反復吹打或渦旋儀徹底打散菌體。采用2mL離心管也有助于細菌重懸。
7. 洗脫液沒有正確滴加到硅膠膜上。
建議：將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置2分鐘增加洗脫效率。
提取獲得低產量質粒DNA
Answer
1. 菌株本身原因。
建議：使用實驗室常用大腸桿菌菌株并確認其培養(yǎng)條件。
2. 低拷貝質粒。
建議：適量增加菌液制備量可一定程度上提高低拷貝質粒DNA的提取量。
3. 細菌重懸不徹底。
建議：離心收集的菌體在加入Buffer S1后徹底重懸，可以使用移液器反復吹打或渦旋儀徹底打散菌體。采用2mL離心管也有助于細菌重懸。
4. Buffer S2、Buffer S3析出少量沉淀。
建議：將Buffer S2、Buffer S3置于37℃溶解，混勻后再使用。
5. 細菌保存時間過長。
建議：使用新制備的細菌提取質粒DNA。
6. 洗脫液問題
建議：請使用Buffer EB進行洗脫；如果使用ddH2O或其他洗脫液，確認洗脫液的pH值在7-8.5之間。
7. 洗脫液沒有正確滴加
建議：請將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置2分鐘增加洗脫效率。
8. 洗脫液體積太少
建議：請按說明書上要求使用洗脫液進行質粒DNA洗脫，最少不要低于50μL。
提取獲得質粒DNA純度低
Answer
1. 質粒DNA污染
a. 分析：細菌培養(yǎng)時間過長或細菌生長過度，部分細菌裂解釋放基因組DNA，并降解。
建議：細菌培養(yǎng)時間控制在16-20hr。
b. 分析：加入BufferS2后劇烈震蕩。
建議：加入Buffer S2后輕柔混勻。不可劇烈震蕩或使用渦旋儀。
c. 分析：裂解時間過長
建議：Buffer S2加入后立即混勻，裂解時間不要超過5分鐘。
2. 雜蛋白污染、內毒素污染、RNA污染
分析：在加入Buffer S3離心后，過柱上清液中含有細小的沉淀；沒有使用Buffer PW洗滌純化柱；Buffer PW洗滌純化柱沒有使用正確的離心轉速。
建議：盡量使用實驗室常見菌株，如DH5α、JM109、Top10等；在上清液過柱時盡量保證上清液中無沉淀；務必按說明書規(guī)定的離心轉速(900 ×g)進行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
3. 雜質離子污染
分析：省略了Buffer WB2洗滌純化柱或者只洗滌了一次，導致殘留的離子污染。
建議：務必按說明書使用Buffer WB2洗滌2次，以盡量去除殘留的離子。
4. RNA酶污染
分析：Buffer S1中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗滌操作不正確，導致RNA酶殘留，影響下游RNA實驗操作，如：體外轉錄等。
建議：Foregene系列質粒提取試劑盒無需額外添加RNA酶即可去除RNA， Plasmid Mini Kit里面所有試劑均無需添加RNA酶；務必按說明書規(guī)定的離心轉速(900 ×g)進行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
5. 乙醇殘留
分析：Buffer WB2洗滌純化柱后，沒有進行空管離心操作。
建議：按說明書進行正確的空管離心操作。
6. 其他質粒DNA污染
分析：在瓊脂糖凝膠電泳出現目的質粒DNA外的其他質粒條帶，可能是轉化質粒菌株被其他雜菌污染。
建議：盡量挑取單克隆細菌進行培養(yǎng)；細菌接種時在無菌環(huán)境中進行。
