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中國福際,World’s Foregene

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去基因組第一鏈cDNA合成預(yù)混體系Master Premix(For qPCR)

高效的去gDNA能力,能在2min內(nèi)去除模板中的gDNA。

高效的逆轉(zhuǎn)錄體系,只需15min即可完成第一鏈cDNA的合成。

復(fù)雜模板:GC含量較高和二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜模板亦能得到很高效率的逆轉(zhuǎn)。

高靈敏的逆轉(zhuǎn)錄體系,pg級別的模板也可以得到高質(zhì)量的cDNA。

逆轉(zhuǎn)錄體系熱穩(wěn)定性高,最適反應(yīng)溫度為42℃,在50℃仍具有良好的逆轉(zhuǎn)錄性能。

產(chǎn) 品 名 稱

去基因組第一鏈cDNA合成預(yù)混體系Master Premix(For qPCR)

RT EasyTM II(With gDNase)

貨    號

RT-01031

RT-01032

規(guī)    格

25 × 20 μL rxns

100  × 20 μL rxns

價    格

440.00

1,323.00

描    述

本產(chǎn)品是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉(zhuǎn)錄體系。

5× gDNase Mix能在42°C,2min快速去除RNA中殘留的基因組,有效的避免了基因組對qPCR結(jié)果的干擾。

產(chǎn)品介紹

RT EasyTM II(With gDNase)是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉(zhuǎn)錄體系。5×gDNase Mix能在42°C,2min快速去除RNA中殘留的基因組,有效的避免了基因組對qPCR結(jié)果的干擾。

5× RO-EasyTM Mix內(nèi)含福際專門研制的Foregene Reverse Transcriptase,是一款新型反轉(zhuǎn)錄酶,具有更強的RNA親和性。優(yōu)化后的體系使得逆轉(zhuǎn)錄速率更快,42°C,15min即可完成第一鏈cDNA的合成。

該試劑盒的逆轉(zhuǎn)錄體系在50°C條件下逆轉(zhuǎn)錄酶也能保持良好的活性,因此對于復(fù)雜的RNA模板更優(yōu)勢,能輕松的轉(zhuǎn)錄GC含量高、二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。


試劑盒應(yīng)用

v 直接用于RealTime PCR定量分析基因的表達。

v 可以快速、準(zhǔn)確地對RNA病毒等微量RNA進行分析。

v GC含量或具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。


儲存條件

試劑盒保存于-20。產(chǎn)品收到后立即存放于-20恒溫冰箱中。如果存儲條件適當(dāng),產(chǎn)品在1年有效期內(nèi)不會降低任何性能。

劑盒內(nèi)容

5× gDNase MixgDNA去除劑,在進行RT反應(yīng)前務(wù)必按照操作說明使用該試劑(內(nèi)部甘油含量較高,-20以上可能不會結(jié)冰,屬于正?,F(xiàn)象)。

5× RO-EasyTM Mix:包含福際生物專門研制的Foregene Reverse Transcriptase、RNase InhibitordNTPs、穩(wěn)定劑、增強劑、優(yōu)化劑及優(yōu)化配比的逆轉(zhuǎn)錄引物(Random PrimerOligo(dT)18 Primer)。


Foregene Reverse Transcriptase

Foregene逆轉(zhuǎn)錄酶能夠提供高效、特異性強的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄酶表現(xiàn)出很高的親和力,并在 50°C反應(yīng)溫度條件下仍然保持良好的逆轉(zhuǎn)錄活性,能夠很好的逆轉(zhuǎn)錄其他逆轉(zhuǎn)錄酶不能處理的二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA。Foregene Reverse Transcriptase 靈敏度高,使用的RNA 量范圍廣泛(0.1pg≤RNA≤1μg)


RT Mix受性

經(jīng)測試分析,2× RT OR-EasyTM Mix對酒精和胍鹽顯示出極高的耐受性。實驗室純化獲得的RNA常有酒精及胍鹽殘留,對逆轉(zhuǎn)錄有很強的抑制性,導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄效果不理想或逆轉(zhuǎn)錄效率低。Foregene RT Easy系列產(chǎn)品對酒精及胍鹽的耐受能力使得逆轉(zhuǎn)錄更容易、高效率的進行。

酒精耐受性分析


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胍鹽耐受性分析


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RNA模板濃度

(0.1pg-1μg total RNAor 0.01pg-0.1μg mRNA) /20 μL體系。



  • 非特異性擴增

    Answer

    1.    引物設(shè)計不合理

    建議:按照引物設(shè)計原則進行引物的設(shè)計。

    2.    基因組殘留。

    建議:確定第一步gDNA去除反應(yīng)溫度為42°C,也可延長反應(yīng)時間至5min


  • RT-QPCR無擴增信號

    Answer

    1.     RNA被降解。

    建議:提取RNA的材料盡量新鮮,應(yīng)用高質(zhì)量高純的的RNA。

    2.    RNA含有抑制劑。

    建議:逆轉(zhuǎn)錄抑制劑一般包括SDS、胍鹽、EDTA等,建議通過70%的乙醇對RNA沉淀進行清洗,除去抑制劑。

    3.    引物設(shè)計問題。

    建議:按照引物設(shè)計原則,重新設(shè)計引物進行檢查。


  • 空白對照出現(xiàn)目的條帶

    Answer

    1.    操作工具或試劑污染。

    建議:實驗所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時應(yīng)小心輕柔,防止將DNA樣品吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。

    2.    PCR反應(yīng)體系制備時發(fā)生污染。

    建議:操作時進行必要的防護措施,比如:戴乳膠手套,使用帶濾芯的槍頭。使用防污染體系的real time PCR Mix。

    3.    引物出現(xiàn)降解。

    建議:使用SDS-PAGE電泳檢測引物是否發(fā)生降解,更換新的引物進行熒光檢測實驗。


相關(guān)產(chǎn)品

COA