產(chǎn) 品 名 稱 | 去基因組第一鏈cDNA合成預(yù)混體系Master Premix(For qPCR) RT EasyTM II(With gDNase) | ||
貨 號 | RT-01031 | RT-01032 | |
規(guī) 格 | 25 × 20 μL rxns | 100 × 20 μL rxns | |
價 格 | ¥440.00 | ¥1,323.00 | |
描 述 | 本產(chǎn)品是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉(zhuǎn)錄體系。 5× gDNase Mix能在42°C,2min快速去除RNA中殘留的基因組,有效的避免了基因組對qPCR結(jié)果的干擾。 |
產(chǎn)品介紹
RT EasyTM II(With gDNase)是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉(zhuǎn)錄體系。5×gDNase Mix能在42°C,2min快速去除RNA中殘留的基因組,有效的避免了基因組對qPCR結(jié)果的干擾。
5× RO-EasyTM Mix內(nèi)含福際專門研制的Foregene Reverse Transcriptase,是一款新型反轉(zhuǎn)錄酶,具有更強的RNA親和性。優(yōu)化后的體系使得逆轉(zhuǎn)錄速率更快,42°C,15min即可完成第一鏈cDNA的合成。
該試劑盒的逆轉(zhuǎn)錄體系在50°C條件下逆轉(zhuǎn)錄酶也能保持良好的活性,因此對于復(fù)雜的RNA模板更優(yōu)勢,能輕松的轉(zhuǎn)錄GC含量高、二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。
試劑盒應(yīng)用
v 直接用于RealTime PCR定量分析基因的表達。
v 可以快速、準(zhǔn)確地對RNA病毒等微量RNA進行分析。
v 高GC含量或具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。
儲存條件
試劑盒保存于-20℃。產(chǎn)品收到后立即存放于-20℃恒溫冰箱中。如果存儲條件適當(dāng),產(chǎn)品在1年有效期內(nèi)不會降低任何性能。
劑盒內(nèi)容
5× gDNase Mix:gDNA去除劑,在進行RT反應(yīng)前務(wù)必按照操作說明使用該試劑(內(nèi)部甘油含量較高,-20℃以上可能不會結(jié)冰,屬于正?,F(xiàn)象)。
5× RO-EasyTM Mix:包含福際生物專門研制的Foregene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、dNTPs、穩(wěn)定劑、增強劑、優(yōu)化劑及優(yōu)化配比的逆轉(zhuǎn)錄引物(Random Primer、Oligo(dT)18 Primer)。
Foregene Reverse Transcriptase
Foregene逆轉(zhuǎn)錄酶能夠提供高效、特異性強的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄酶表現(xiàn)出很高的親和力,并在 50°C反應(yīng)溫度條件下仍然保持良好的逆轉(zhuǎn)錄活性,能夠很好的逆轉(zhuǎn)錄其他逆轉(zhuǎn)錄酶不能處理的二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA。Foregene Reverse Transcriptase 靈敏度高,使用的RNA 量范圍廣泛(0.1pg≤RNA≤1μg) 。
RT Mix耐受性
經(jīng)測試分析,2× RT OR-EasyTM Mix對酒精和胍鹽顯示出極高的耐受性。實驗室純化獲得的RNA常有酒精及胍鹽殘留,對逆轉(zhuǎn)錄有很強的抑制性,導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄效果不理想或逆轉(zhuǎn)錄效率低。Foregene RT Easy系列產(chǎn)品對酒精及胍鹽的耐受能力使得逆轉(zhuǎn)錄更容易、高效率的進行。
酒精耐受性分析
胍鹽耐受性分析
RNA模板濃度
(0.1pg-1μg total RNAor 0.01pg-0.1μg mRNA) /20 μL體系。
說明書
產(chǎn)品文獻
Association between inflammatory-response gene polymorphisms and risk of acute kidney injury in children Jing He, Guoyan Xie, Hui Wu, Song Xu, Jun Xie, Youyuan Chen, Xinqian Zhao
貴州省畢節(jié)第一人民醫(yī)院兒科
Bioscience Reports ( IF 2.899 ) Pub Date : 2018-12 , DOI: 10.1042/BSR20180537
文章鏈接:http://www.bioscirep.org/content/38/6/BSR20180537
MSDS
COA
非特異性擴增
Answer
1. 引物設(shè)計不合理
建議:按照引物設(shè)計原則進行引物的設(shè)計。
2. 基因組殘留。
建議:確定第一步gDNA去除反應(yīng)溫度為42°C,也可延長反應(yīng)時間至5min。
RT-QPCR無擴增信號
Answer
1. RNA被降解。
建議:提取RNA的材料盡量新鮮,應(yīng)用高質(zhì)量高純的的RNA。
2. RNA含有抑制劑。
建議:逆轉(zhuǎn)錄抑制劑一般包括SDS、胍鹽、EDTA等,建議通過70%的乙醇對RNA沉淀進行清洗,除去抑制劑。
3. 引物設(shè)計問題。
建議:按照引物設(shè)計原則,重新設(shè)計引物進行檢查。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議:實驗所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時應(yīng)小心輕柔,防止將DNA樣品吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。
2. PCR反應(yīng)體系制備時發(fā)生污染。
建議:操作時進行必要的防護措施,比如:戴乳膠手套,使用帶濾芯的槍頭。使用防污染體系的real time PCR Mix。
3. 引物出現(xiàn)降解。
建議:使用SDS-PAGE電泳檢測引物是否發(fā)生降解,更換新的引物進行熒光檢測實驗。
本產(chǎn)品是專門為Real Time PCR研制的逆轉(zhuǎn)錄體系,預(yù)混優(yōu)化配比的反轉(zhuǎn)錄引物(Oligo(dT)引物和隨機引物),無需單獨添加。
便捷的逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系Master Premix,逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物適用于克隆全長cDNA,qPCR等。
熱啟動Foregene Taq Polymerase,具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性;同時還包含藍色指示劑,便于移液示蹤,有效減少移液錯誤。