產(chǎn) 品 名 稱 | 第一鏈cDNA合成預(yù)混體系Master Premix RT EasyTM I | ||
貨 號 | RT-01011 | RT-01012 | |
規(guī) 格 | 25 × 20 μL rxns | 100 × 20 μL rxns | |
價(jià) 格 | ¥424.00 | ¥1,456.00 | |
描 述 | 便捷的逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系Master Premix,逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物適用于克隆全長cDNA,qPCR等。 |
產(chǎn)品介紹
本公司的2× RT EasyTM Mix合成第一鏈cDNA的溫度高達(dá)50℃,有利于復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)RNA模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)室純化獲得的RNA常有酒精及胍鹽殘留,對大多數(shù)逆轉(zhuǎn)錄酶有很強(qiáng)的抑制性,導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄效果不理想或逆轉(zhuǎn)錄效率低。福際2× RT EasyTM Mix對酒精和胍鹽顯示出極高的耐受性,對RNA樣品中酒精的最高耐受為45%,胍鹽的最高耐受為750mM。即使不純的RNA也可用福際2× RT Mix進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。獨(dú)特的反應(yīng)體系,使得RT反應(yīng)更加簡便、快捷、高效,25min即可完成第一鏈cDNA的合成。
此產(chǎn)品可與Foregene公司的熒光定量產(chǎn)品Real Time PCR EasyTM 配合使用,能獲得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
試劑盒應(yīng)用
v 常規(guī)RT-PCR。
v 合成cDNA,用于克隆和表達(dá)研究。
v 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的引物延伸法分析。
v RACE(cDNA末端快速擴(kuò)增)。
v 線性RNA擴(kuò)增。
v 芯片標(biāo)記。
儲存條件
試劑盒保存于-20℃。產(chǎn)品收到后立即存放于-20℃恒溫冰箱中。如果存儲條件適當(dāng),產(chǎn)品在1年有效期內(nèi)不會降低任何性能。
劑盒內(nèi)容
2× RT EasyTM Mix:Foregene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、dNTPs、反應(yīng)緩沖液、優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑等。
Random Primer (50μM):6個(gè)寡聚核苷酸的隨機(jī)引物,其濃度為50μM。
Oligo(dT)18 Primer (50μM):具有18個(gè)dT的引物,其濃度為50μM。
Foregene Reverse Transcriptase
Foregene逆轉(zhuǎn)錄酶能夠提供高效、特異性強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄酶表現(xiàn)出很高的親和力,并在 50°C反應(yīng)溫度條件下仍然保持良好的逆轉(zhuǎn)錄活性,能夠很好的逆轉(zhuǎn)錄其他逆轉(zhuǎn)錄酶不能處理的二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA。Foregene Reverse Transcriptase 靈敏度高,使用的RNA 量范圍廣泛(0.1pg≤RNA≤1μg) 。
RT Mix耐受性
經(jīng)測試分析,2× RT EasyTM Mix對酒精和胍鹽顯示出極高的耐受性。實(shí)驗(yàn)室純化獲得的RNA常有酒精及胍鹽殘留,對逆轉(zhuǎn)錄有很強(qiáng)的抑制性,導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄效果不理想或逆轉(zhuǎn)錄效率低。Foregene RT Easy系列產(chǎn)品對酒精及胍鹽的耐受能力使得逆轉(zhuǎn)錄更容易、高效率的進(jìn)行。
酒精耐受性分析
胍鹽耐受性分析
RNA模板濃度
(0.1pg-5μg total RNAor 0.01pg-0.5μg mRNA) /20 μL體系。
說明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
MiR-610 functions as a tumor suppressor in oral squamous cell carcinoma by directlytargeting AGK
L.-X. YAO, J. LIU, L. XU
山東省聊城市人民醫(yī)院口腔外科
European Review for Medical and Pharmacological Sciences ( IF 2.387 ) Pub Date : 2019, DOI:10.26355/eurrev_201901_16764
文章鏈接:https://www.europeanreview.org/wp/wp-content/uploads/187-197.pdf
MSDS
COA
非特異性擴(kuò)增
Answer
1. 引物設(shè)計(jì)不合理
建議:按照引物設(shè)計(jì)原則進(jìn)行引物的設(shè)計(jì)。
2. 基因組殘留。
建議:使用含有基因組去除的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒如(Cat.No.RH-01031)或者設(shè)計(jì)跨內(nèi)含子引物。
RT-QPCR無擴(kuò)增信號
Answer
1. RNA被降解。
建議:提取RNA的材料盡量新鮮,應(yīng)用高質(zhì)量高純的的RNA。
2. RNA含有抑制劑。
建議:逆轉(zhuǎn)錄抑制劑一般包括SDS、胍鹽、EDTA等,建議通過70%的乙醇對RNA沉淀進(jìn)行清洗,除去抑制劑。
3. 引物設(shè)計(jì)問題。
建議:按照引物設(shè)計(jì)原則,重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議:實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔,防止將DNA樣品吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。
2. PCR反應(yīng)體系制備時(shí)發(fā)生污染。
建議:操作時(shí)進(jìn)行必要的防護(hù)措施,比如:戴乳膠手套,使用帶濾芯的槍頭。使用防污染體系的real time PCR Mix。
3. 引物出現(xiàn)降解。
建議:使用SDS-PAGE電泳檢測引物是否發(fā)生降解,更換新的引物進(jìn)行熒光檢測實(shí)驗(yàn)。
本產(chǎn)品是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉(zhuǎn)錄體系。5× gDNase Mix能在42°C,2min快速去除RNA中殘留的基因組,有效的避免了基因組對qPCR結(jié)果的干擾。
本產(chǎn)品是專門為Real Time PCR研制的逆轉(zhuǎn)錄體系,預(yù)混優(yōu)化配比的反轉(zhuǎn)錄引物(Oligo(dT)引物和隨機(jī)引物),無需單獨(dú)添加。
熱啟動Foregene Taq Polymerase,具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性;同時(shí)還包含藍(lán)色指示劑,便于移液示蹤,有效減少移液錯誤。